紫外光度計箱體蓋子沒蓋緊會影響吸光度嗎

問題描述：　　1.儀器是否工作正常（光源燈老化，電壓不穩(wěn)定，集成電路板、顯示器有毛病，波長調(diào)節(jié)器有毛病等等） 　　2.標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度是否準(zhǔn)確 　　3.所用方法是否合理（你選用的標(biāo)準(zhǔn)方法是否符合你要測定的對象——被測定濃度范圍，干擾情況，賦存狀態(tài)等等） 　　4.所用試劑是否符合要求（純度、干擾情況） 　　5.所用量器（天平、容量瓶、移液管等）是否存在系統(tǒng)誤差 　　6.配置顯色過程是否誤操作（加入試劑順序、加入量等） 　　7.顯色時間、顯色溫度是否符合要求 　　8.樣品槽是否潔凈 　　9.測試吸光度范圍是否在0.2--0.8之間 　　除此之外，數(shù)據(jù)處理也會帶來誤差。最好采用標(biāo)準(zhǔn)系列法，平行多次測定，計算機程序繪圖，計算機計算每側(cè)測定結(jié)果并求出平均值，按誤差理論對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，最后給出結(jié)果。

回答(1).　　紫外的吸收值A(chǔ)與濃度C之間關(guān)系是A=ECL,朗伯-比爾定律，在A=0.2--0.8之間時，吸收度與濃度c呈線性正比關(guān)系，A太大或太小兩者關(guān)系直線會變成曲線，不成正比。 　　因為比色皿都是放一起的，每次用的都不是同樣的，應(yīng)該都挺干凈的。 國標(biāo)是測700nm波長下的吸光度，來算磷的濃度的。 　　先用相同溶劑測測兩個比色杯的吸收度是否一樣，扣除空白是用溶劑（例如，測樣用的是水做溶劑，則用水做空白）。

回答(2).波長調(diào)了嗎，至于測得吸光度，減去空白對照的話不會比實際值有太大出入

回答(3).250-300 nm 有中等強度的吸收峰（ε=200-2000），芳環(huán)的特征 吸收（具有精細(xì)解構(gòu)的B帶）。

回答(4).1.調(diào)整(1) 在接通電源前，應(yīng)對儀器的安全性進(jìn)行檢查，電源線接線應(yīng)牢固，接地線通地要良好，各個調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確，然后再接通電源。 (2) 將靈敏度旋鈕調(diào)至“1”檔(放大倍率最小)。調(diào)波長調(diào)節(jié)器至所需波長。 (3) 開啟電源開關(guān)，指示燈亮，選擇開關(guān)置于“T”，調(diào)節(jié)透光率[100?旋鈕使數(shù)字顯示[100.0]左右，預(yù)熱20min . 根據(jù)溶液濃度大小，選擇液層厚度合適的吸收池。 2.校正(!)打開吸收池暗室蓋(光門自動關(guān)閉)，調(diào)節(jié)[0?]旋鈕，使數(shù)字顯示為“00.0”，蓋上吸收池蓋，將參比溶液置于光路，使光電管受光，調(diào)節(jié)透光率[100?] 旋鈕，使數(shù)學(xué)顯示為“100.0”。 (2)如果顯示不到“100”，則可適當(dāng)增加電流放大器靈敏度檔數(shù)，但應(yīng)盡可能使用低檔數(shù)，這樣儀器將有更高的穩(wěn)定性。當(dāng)改變靈敏度 后必須重新校正“0”和“100”。 (3)按(1)連續(xù)幾次調(diào)整“00.0”和“100.0”后，如將選擇開關(guān)置于“A”，調(diào)節(jié)吸光度調(diào)零旋鈕，使數(shù)字顯示為“.000”，即可進(jìn)行下面吸光度A的測量;如將選擇開關(guān)置于“C”，將標(biāo)準(zhǔn)溶液推入光路，調(diào)節(jié)濃度旋鈕，使得數(shù)字顯示值為已知標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度數(shù)值，即可進(jìn)行下面濃度c的測量。 3.測定(1) 吸光度A的測量。將要測A的試樣溶液推入光路，顯示值即為待測樣品的吸光度值A(chǔ)。 (2) 濃度c的測量。將要測c試樣溶液推入光路，即可讀出待測樣品的濃度值c。 4.結(jié)束測量完畢，關(guān)閉電源，將各調(diào)節(jié)旋鈕恢復(fù)至初始位置。取出吸收池洗凈，晾干，存于專用盒內(nèi)。 注意事項:(1) 使用前，使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和原理，以及各個旋鈕之功能。 (2) 儀器接地要良好，否則顯示數(shù)字不穩(wěn)定。 (3) 如果大幅度改變測試波長時，在調(diào)整“00.0”和“100”后稍等片刻(因光能量變化急劇，光電管受光后響應(yīng)緩慢，需一段光響應(yīng)平衡時間)，當(dāng)穩(wěn)定后，重新調(diào)整“00.0”和“100”即可工作。 (4) 儀器左側(cè)下角有一只干燥劑筒，應(yīng)保持其干燥，發(fā)現(xiàn)干燥劑變色應(yīng)立即更新或烘干后再用。 (5) 當(dāng)儀器停止工作時，關(guān)掉電源，電源開關(guān)需同時切斷，并罩好儀器 希望以上對你有所幫助。

回答(5).剛好個人前段時間也思考了一下這個方面，所以回復(fù)下個人理解。這里說紫外吸光度： A=-lgT 其中A是吸光度，T是透過率，即入射光透過樣品后的光強（透過光強）與透過前入射光強的比值。 入射光照射在待測樣品上，會有反射、散射、透射以及吸收。因此，入射光強=反射光強+散射光強+透射光強+吸收光強?？紤]一般的溶液樣品，散射和反射可以忽略不計或者經(jīng)參比樣品扣除，因此入射光強可近似等于透射光強+吸收光強。 對于紫外吸收光譜而言，是由價電子受激躍遷而形成的。因此，當(dāng)待測樣品確定的時候（組成及物質(zhì)的量確定），測量設(shè)備及儀器不發(fā)生變動的情況下（主要指吸收光程、測量時間等），吸收光強理論上是恒定的。 正常情況入射光能量足夠，即入射光強比吸收光強要強，即在吸收光程內(nèi)物質(zhì)的紫外吸收達(dá)到了飽和。另一方面，對于特定的價電子躍遷而言，是否發(fā)生躍遷只和激發(fā)光的頻率（即能量）有關(guān)，而與光的強弱無關(guān)。 因此，如果光源的強度，即入射光強發(fā)生變化（正常情況下仍比樣品吸收光強要強），吸收光強理論上應(yīng)該不變，使得透射光強會發(fā)生變化。 放在透過率計算上來看，就是相當(dāng)于分子分母同時加上某一個不為零的數(shù)值。而由于分子分母不相等，所以勢必造成透過率的變化，從而造成吸光度的變化。這里可以說，吸光度和光源強度有關(guān)系。 第二，光源在不同波長處的光的強弱是不同的，并且對于待測樣品而言，對于不同波長處的光的吸收能力不同。將所有波長連一起，就是某一波段的吸收光譜。因此，光源強度發(fā)生變化會導(dǎo)致吸收光譜所有波長處的吸光度都發(fā)生變化。 但是，當(dāng)光源強度發(fā)生變化時，往往不同波長處的變化幅度是不一樣的。比如，以兩個不同的光源為例，可能因為氘燈不一樣、濾光片對不同波長的透過率不一樣（也可以說沒有完全相同的濾光片）等等，兩個光源的光強在波長a處相差了30?而在波長b處就相差了50? 因此，光源強度發(fā)生變化不僅會導(dǎo)致各個波長處的吸光度發(fā)生變化，而且往往變化幅度不一致，即導(dǎo)致吸收光譜的形狀發(fā)生變化。

回答(6).標(biāo)準(zhǔn)方法用的50mL比色管，現(xiàn)在手邊只有25mL的，可以用25mL代替。所加待測液、各種試劑直接減半。標(biāo)曲若用100mL的，那就是增加一倍。這樣操作對結(jié)果沒有影響。還有就是標(biāo)曲用100mL的、待測液用25mL的，不是同規(guī)格比色管，對結(jié)果沒有影響，因為紫外可見分光光度計的比色池用一套，厚度都是一樣的，除非放在不一樣的比色管用眼睛直接看才有影響，這樣的話只能再倒在一樣大的比色管里，總之只要濃度一樣就可以了。 比色法 供試品本身在紫外-可見光區(qū)沒有強吸收，或在紫外光區(qū)雖有吸收但為了避免干擾或提高靈敏度，加入適當(dāng)?shù)娘@色劑，使反應(yīng)產(chǎn)物的最大吸收移至可見光區(qū)。 用比色法測定時，由于顯色時影響顯色深淺的因素較多，應(yīng)取供試品與對照品或標(biāo)準(zhǔn)品同時操作。除另有規(guī)定外，比色法所用的空白系指用同體積的溶劑代替對照品或供試品溶液，然后依次加入等量的相應(yīng)試劑，并用同樣方法處理。 當(dāng)吸光度和濃度關(guān)系不呈良好線性時，應(yīng)取數(shù)份梯度量對照品溶液，用溶劑補充至同一體積，顯色后測定各份溶液的吸光度，然后以吸光度與相應(yīng)的濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再根據(jù)供試品的吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得其相應(yīng)的濃度，并求出其含量。 5 注意事項 5.1 試驗中所用的量瓶和移液管均應(yīng)經(jīng)檢定校正、洗凈后使用。 5.2 使用的石英吸收池必須潔凈。當(dāng)吸收池中裝入同一溶劑，在規(guī)定波長測定各吸收池的透光率，如透光率相差在0.3?下者可配對使用，否則必須加以校正。 5.3 取吸收池時，手指拿毛玻璃面的兩側(cè)。裝樣品溶液以池體積的4/5為度，使用揮發(fā)性溶液時應(yīng)加蓋，透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈，檢視應(yīng)無殘留溶劑，為防止溶劑揮發(fā)后溶質(zhì)殘留在池子的透光面，可先用醮有空白溶劑的擦鏡紙擦拭，然后再用干擦鏡紙拭凈。吸收池放入樣品室時應(yīng)注意每次放入方向相同。使用后用溶劑及水沖洗干凈，晾干防塵保存，吸收池如污染不易洗凈時可用硫酸發(fā)煙硝酸(3：1V/V)混合液稍加浸泡后，洗凈備用。如用鉻酸鉀清潔液清洗時，吸收池不宜在清潔液中長時間浸泡，否則清潔液中的鉻酸鉀結(jié)晶會損壞吸收池的光學(xué)表面，并應(yīng)充分用水沖洗，以防鉻酸鉀吸附于吸收池表面。 5.4 含有雜原子的有機溶劑，通常均具有很強的末端吸收。因此，當(dāng)作溶劑使用時，它們的使用范圍均不能小于截止使用波長。例如甲醇、乙醇的截止使用波長為205nm。另外，當(dāng)溶劑不純時，也可能增加干擾吸收。因此，在檢查所用的溶劑在供試品所用的波長附近是否符合要求，即將溶劑置lcm石英吸收池中，以空氣為空白(即空白光路中不置任何物質(zhì))測定其吸光度，溶劑和吸收池的吸光度應(yīng)符合表3規(guī)定。 表3 以空氣為空白測定溶劑在不同波長處的吸光度的規(guī)定 波長范圍(nm) 220-240 241-250 251-300 300以上 吸光度 ≤ 0.40 ≤ 0.20 ≤ 0.10 ≤ 0.05 每次測定時應(yīng)采用同一廠牌批號，混合均勻的同批溶劑。 5.5 稱量應(yīng)按藥典規(guī)定要求。配制測定溶液時稀釋轉(zhuǎn)移次數(shù)應(yīng)盡可能少，轉(zhuǎn)移稀釋時所取容積一般應(yīng)不少于5ml。含量測定時供試品應(yīng)稱取2份，如為對照品比較法，對照品一般也應(yīng)稱取2份......

回答(7).有兩種可能接近4： 1、那人用的儀器靈敏度很高，但也不應(yīng)該報這樣的測定結(jié)果。 2、那人測定時把溶液稀釋了，然后的數(shù)據(jù)是吸光度×稀釋倍數(shù)。

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